1、从液氮中取出一管细胞。

2、将冻存管置于37摄氏度水浴中2分钟（或放到管内溶液恰好完全溶解）。

3、将细胞转移到一15ml Falcon管中。

4、加入5ml ES培养基（用培养基冲洗冻存管）。

5、离心3分钟。

6、弃上清，用2ml ES培养基重悬细胞，至少吹打10次。

7、接种在明胶包被的6孔或6cm组织培养皿。

8、孵育。